• page_banner

Новини

В момента Javascript е деактивиран във вашия браузър.Някои функции на този уебсайт няма да работят, ако JavaScript е деактивиран.
Регистрирайте се с вашите конкретни данни и конкретното лекарство, което ви интересува, и ние ще съпоставим предоставената от вас информация със статиите в нашата обширна база данни и незабавно ще ви изпратим PDF копие по имейл.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Катедра по инфекциозни болести, Първа свързана болница на университета Суджоу, град Суджоу, провинция Дзянсу, 215000 Тел.тумори на храносмилателната система с 5-годишна обща преживяемост от 14,1%.Много пациенти с HCC се диагностицират в напреднал стадий, така че ранният скрининг е от съществено значение за намаляване на смъртността от HCC.В допълнение към често използваните индикатори за откриване като серумен алфа-фетопротеин (AFP), лектин-реактивен алфа-фетопротеин в лещата (AFP-L3) и анормален протромбин (протеин II, предизвикан от дефицит на витамин К, PIVKA-II), техники за флуидна биопсия Доказано е, че има диагностична стойност при откриването на HCC.В сравнение с инвазивните процедури, течната биопсия може да открие циркулиращи злокачествени метаболити.Техниките за флуидна биопсия откриват циркулиращи туморни клетки, циркулираща туморна ДНК, циркулираща РНК и екзозоми и се използват за ранен скрининг, диагностика и прогностична оценка на HCC.Тази статия прави преглед на молекулярната биология и приложението на различни техники за флуидна биопсия за изолиране на обещаващи биомаркери, които могат да бъдат жизнеспособни опции за ранна оценка на HCC за подобряване на ранния скрининг на високорискови групи с HCC.Ключови думи: техника на течна биопсия, хепатоцелуларен карцином, високорискова група.
Хепатоцелуларният карцином (HCC) е често срещан злокачествен тумор на храносмилателния тракт, заемащ шесто място сред новите случаи на злокачествени тумори при мъже и жени.1 В световен мащаб ракът на черния дроб е третата водеща причина за смърт от рак след белодробния и колоректалния рак, като представлява 8,3% от свързаните с рака смъртни случаи от всички злокачествени неоплазми.1 Прогнозата на HCC е тясно свързана със стадия при поставяне на диагнозата.Основните причини за лоша преживяемост при HCC са интрахепатални метастази, портални венозни туморни тромби и далечни метастази, изключващи резекция, и много от тези характеристики вече присъстват при пациентите по време на диагнозата.
Въз основа на насоките за диагностика и лечение, основните рискови фактори за развитие на HCC са цироза на черния дроб, хронична инфекция с вируса на хепатит B (HBV) или вируса на хепатит C (HCV), алкохолно мастно чернодробно заболяване и неалкохолно мастно чернодробно заболяване (NAFLD ).2 В допълнение, рисковите фактори за HCC включват прием на замърсена с афлатоксин храна, шистозомиаза, други причини за цироза, фамилна анамнеза за рак на черния дроб, диабет, затлъстяване, тютюнопушене и предизвикано от лекарства чернодробно увреждане.35- и 45-годишните рискови групи трябва да се подлагат на редовни медицински прегледи.Ранният скрининг е важна стратегия за ранно лечение за подобряване на общата преживяемост на пациенти с HCC.
Биомаркери като AFP, AFP-L3 и PIVKA-II се препоръчват за ранен скрининг на HCC3,4.Техниките за течна биопсия са показали обещаващи резултати при ранна диагностика и оценка на лечението.5,6 Значителен напредък е постигнат в течната биопсия на HCC, която може да има по-висока чувствителност и специфичност от често използваните серумни маркери като AFP (Таблица 1).
AFP е широко използван биомаркер при HCC и в момента е най-подробният биомаркер, широко използван за ранен скрининг, диагностика и оценка на заболяването.Постоянно повишеното ниво на AFP се счита за рисков фактор за прогресията на HCC.7,8 Степента на откриване на малък хепатоцелуларен карцином (sHCC) се увеличава с развитието на ултразвука и компютърната томография и е установено, че AFP е особено нечувствителен към откриването на hHCC в клиничната практика.Според ретроспективно многоцентрово проучване9 AFP положителен е установен при 46% (616/1338) от случаите на HCC и 23,4% (150/641) от случаите на sHCC.В допълнение, нивата на AFP са повишени при пациенти с хронично чернодробно заболяване и цироза.10 Следователно AFP има ограничен скрининг ефект за sHCC.11 Според Азиатско-тихоокеанските насоки за клинична практика за хепатоцелуларен карцином, употребата на AFP не се препоръчва.12 Клиничните данни сочат, че PIVKA-II превъзхожда AFP при лечението на HCC и че комбинацията от PIVKA-II и AFP има по-висока диагностична стойност при HCC.13 В сравнение с тъканната биопсия, флуидната биопсия открива предимно метаболити, свързани с тумора, в телесни течности (кръв, слюнка, плеврална течност, цереброспинална течност или урина) и е по-малко инвазивна за тъканите.14 В допълнение, течните биопсии могат да отразяват злокачествени характеристики, които не присъстват в първичната туморна тъкан.15 Течните биопсии все още не са тествани в клиничната практика за всички видове тумори, но техният диагностичен потенциал при рак привлича вниманието на онколозите.16 Течната биопсия може да открие циркулиращи туморни клетки (CTCs), циркулираща туморна ДНК (cDNA), циркулираща свободна РНК (ecRNA) и екзозоми.В тази статия ще обсъдим характеристиките, ролята и приложението на различни техники за флуидна биопсия при ранен скрининг на високорискови HCC групи.
Извънклетъчната ДНК (cfDNA) в кръвни проби от здрави индивиди е описана за първи път през 1948 г. от Mandel et al.17 cfDNA е безклетъчен ДНК фрагмент с дължина приблизително 160–180 bp, произхождащ основно от лимфоцити и миелоидни клетки.ctDNA е специфичен мутантен ДНК фрагмент, освободен от туморни клетки в периферната кръв, който представлява геномната информация на туморните клетки след определени патофизиологични процеси, включително некроза, апоптоза и екскреция.Делът на ctDNA в общата cfDNA варира в широки граници в зависимост от вида на тумора и се съобщава, че кДНК фрагментите обикновено са с дължина под 167 bp.18 Проучването на Underhill показа, че cfDNA фрагментите обикновено са по-къси от нормалната cfDNA.19 В сравнение със здрави индивиди, общата дължина на cfDNA фрагментите в кръвта на пациенти с рак е по-къса, така че cfDNA може да се използва като индикатор за ранен туморен скрининг.Обогатяването на определени подгрупи от дължини на cfDNA фрагменти може да подобри откриването на cDNA, свързана с неметастатични солидни тумори.Проучванията показват, че ctDNA се открива в над 75% от напредналите ракови заболявания на панкреаса, дебелото черво, пикочния мехур, стомашно-чревния тракт, черния дроб, яйчниците, гърдата, меланома и рак на главата и шията.20,21 Въпреки това, количеството на ctDNA в кръвта зависи от местоположението на тумора.22 В проучване на Bettegoud е установено, че пациентите с колоректален рак, рак на гърдата, черния дроб, белите дробове и простатата имат по-високи нива на cDNA в кръвта си, отколкото други видове рак.Обратно, при пациенти с рак на устната кухина, рак на панкреаса, рак на стомаха и глиома, концентрацията на кДНК в кръвта е по-ниска.двадесет и едно
Тъй като ctDNA съдържа същите генетични мутации като първичните туморни клетки, cDNA може да се използва за откриване на хетерогенни тумор-специфични мутации и епигенетични промени, включително метилиране, хидроксиметилиране, единични нуклеотидни вариации и вариации на броя на копията.двадесет и три
ДНК метилирането е една от най-честите епигенетични промени, водещи до генна репресия.В сравнение с нормалните клетки има разлики в общото ниво на метилиране на генома на туморната клетка, особено в метилирането на туморни супресорни гени, които могат да бъдат открити на ранен етап, което предполага, че промените в метилирането на ДНК може да са индикатор за ранно откриване на туморогенеза.Туморните супресорни гени, свързани с HCC, могат да бъдат инактивирани чрез промоторно метилиране, като по този начин се стимулира туморогенезата.24 ДНК метилирането е идеален маркер за ранна диагностика на тумори поради тъканната му специфичност, откриваемост и възрастова независимост.В допълнение, ДНК метилирането е по-често срещано в сравнение със соматичните мутации, тъй като има повече целеви региони и няколко променени CpG места във всеки регион на целевия геном.25 В допълнение към множество CpG места, голям брой независими хиперметилирани локуси в ctDNA са идентифицирани в DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 и RGS10.26 Xu et al.Сравнението на cfDNA проби от 1098 пациенти с HCC и 835 здрави контроли беше установено, че гените, свързани с HCC, силно корелират със съответните сигнатури на метилиране на cDNA в плазмата.25 Въз основа на лабораторен анализ беше разработен предсказващ модел, съдържащ 10 маркера за метилиране с чувствителност и специфичност съответно 85,7% и 94,3%, и тези маркери бяха силно корелирани с туморната маса, стадия на тумора и отговора на лечението.Тези резултати показват, че използването на маркери за метилиране на cDNA има голямо обещание в диагностиката, мониторинга и прогнозата на HCC.В модел на метилиране, състоящ се от три анормално метилирани гена (APC, COX2, RASSF1A) и една miRNA (miR203), представен от Lu et al27, чувствителността и специфичността на модел 27 за диагностициране на HBV-асоцииран HCC са сравними.80%.В допълнение, моделът може да открие 75% от недиагностицираните пациенти с HCC с ниво на AFP от 20 ng/mL.Генът за Ras-асоциирания домейн семейство 1A протеин (RASSF1A) е основната повтаряща се ДНК последователност в човешкия геном.Araujo и др.заключиха, че хиперметилирането на промотора RASSF1A може да бъде ценен биомаркер за ранен скрининг на HCC и потенциална молекулярна цел за епигенетична терапия.28 В едно проучване хиперметилирането на серумен RASSF1A промотор е открито при 73,3% от пациентите с HCC.29 Дълго разпръснат нуклеотиден елемент 1 (LINE-1) е друг силно активен ретротранспозиционен медиатор.Хипометилиране на LINE-1 беше открито в ДНК на 66,7% от HCC серумни проби и беше свързано с ранен рецидив и лоша преживяемост след радикална резекция.29 Хиперметилирането е често срещан генетичен процес, който играе уникална роля в развитието на чернодробна цироза и HCC.30 Обратно, хидроксиметилирането е процес на деметилиране, който индуцира реактивиране и експресия на ген, и откриването на продукта 5-хидроксиметилцитозин (5-hmC) в този процес може да се използва за идентифициране на тумор.Метилирането и хидроксиметилирането на cDNA са свързани с туморогенезата и могат да допринесат за ранния скрининг на HCC.В проучване на 2554 субекта, 31 5-hmCs в целия геном бяха открити в cfDNA проби и 32 гена бяха идентифицирани чрез сравняване на 5-hmC последователности при пациенти с HCC и високорискови групи като тези с хронични заболявания.Диагностични модели на чернодробни заболявания.и цироза.Този модел превъзхожда AFP при разграничаването на HCC от нетуморната тъкан.
Мутациите в кодиращите региони могат да доведат до транскрипционни аномалии, които могат да доведат до промени в протеиновите последователности и в крайна сметка до рак.Единичните нуклеотидни варианти са важни геномни маркери за ранен туморен скрининг поради тяхната висока тъканна надеждност и висока туморна и тъканна специфичност.Многобройни проучвания, свързани с HCC, използващи секвениране от следващо поколение (NGS) за секвениране на екзома и целия геном на рак, са идентифицирали общи мутирали клетъчни гени като TP53 и CTNNB1, както и няколко, включително ARID1A, MLL, IRF2.Новите гени, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 и JAK1 показват умерени нива на мутация. Анализът на функцията на мутантния ген предполага, че промените в ремоделирането на хроматина, Wnt/β-катенин и JAK/STAT сигналната трансдукция, пътя на P53-клетъчния цикъл, епигенетичните модификатори, пътищата на оксидативния стрес, пътя PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/ Пътят на MAPK киназата играе решаваща роля в онкогенезата на HCC.32,33 В проучване, в което са открити тумор-асоциирани мутации, Huang et al установяват, че честотата на тумор-асоциираните мутации, зависещи от ctDNA, е 19,5%, а специфичността е 90% .34 В допълнение, пациентите, които са претърпели съдова инвазия, са по-склонни да имат ctDNA мутации (P=0,041) и по-кратка преживяемост без рецидив (P<0,001). Анализът на функцията на мутантния ген предполага, че промените в ремоделирането на хроматина, Wnt/β-катенин и JAK/STAT сигналната трансдукция, пътя на P53-клетъчния цикъл, епигенетичните модификатори, пътищата на оксидативния стрес, пътя PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/ Пътят на MAPK киназата играе решаваща роля в онкогенезата на HCC.32,33 В проучване, в което са открити тумор-асоциирани мутации, Huang et al установяват, че честотата на тумор-асоциираните мутации, зависещи от ctDNA, е 19,5%, а специфичността е 90% .34 В допълнение, пациентите, които са претърпели съдова инвазия, са по-склонни да имат ctDNA мутации (P=0,041) и по-кратка преживяемост без рецидив (P<0,001).Анализът на функцията на мутантния ген предполага, че промените в ремоделирането на хроматина, Wnt/β-катенин и JAK/STAT сигнализирането, пътя на P53 клетъчния цикъл, епигенетичните модификатори, пътищата на оксидативния стрес, PI3K/AKT/MTOR пътя и RAS/RAF/MAPK киназния път критична роля в HCC туморогенезата.32,33 В проучване, което открива свързани с тумора мутации, Huang et al.установиха, че честотата на ctDNA-зависимите мутации, свързани с тумора, е 19,5%, а специфичността е 90%..34 Освен това, при пациенти със съдова инвазия често се срещат мутации на цДНК (P=0,041) и по-кратка безрецидивна изживяемост (P<0,001). .34 В допълнение, пациентите със съдова инвазия са имали повече cDNA мутации (P=0,041) и по-кратка преживяемост без заболяване (P<0,001).Функционалният анализ на мутантните гени разкрива ремоделиране на хроматин, Wnt/β-катенин и JAK/STAT сигнализиране, пътя на клетъчния цикъл P53, епигенетични модификатори, пътя на оксидативния стрес, пътя PI3K/AKT/MTOR и RAS/RAF/MAPK киназният път играе критична роля в онкогенезата на HCC. 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中,Huang 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19.5%,特异性为90% .34 此外,经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变(P=0,041)和更短的无复发生存期(P<0,001)。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 , huang 等 发现 肿瘤 相关 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 19.5% , 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 ctdna突变(P=0.041)和更短的无复发生存期(P<0,001).32,33 В проучване, което открива свързани с тумора мутации, Huang et al.установяват, че свързаните с тумора мутации са 19,5% зависими от cDNA със специфичност от 90% 34. В допълнение, пациентите, които са претърпели съдова инвазия, са по-склонни да развият cDNA.мутация (P = 0,041) и по-къса безрецидивна активност (P <0,001). мутация (P=0,041) и по-кратка преживяемост без заболяване (P<0,001).Друг често срещан HCC драйверен ген е TP53, който има процент на мутация над 30%.Проучванията показват, че честотата на мутациите на TP53 в ctDNA в кръвта и урината варира от 5% до 60%.35 Проучването на Йохан показа, че мутационният спектър на ctDNA в късния HCC има подобен процент на мутация като ранния HCC, включително TERT промотора (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), мутации в AXIN1., ARID2, KMT2D и TSC2 (6% всеки).36 Онкогенът β-катенин (CTNNB1) играе важна роля в Wnt сигналния път.Транскрипционният коактиватор CTNNB1 може да стимулира генната експресия, което може да доведе до клетъчна пролиферация, инхибиране на апоптоза и ангиогенеза.CTNNB1 може също да взаимодейства с TERT, за да индуцира трансформация на хепатоцити.33 TERT промоторът често е мутиран в някои солидни тумори.Промените в TERT, една от най-ранните генетични промени в злокачествената трансформация на HCC, могат да доведат до реактивиране на теломераза в цирозни хепатоцити и могат да насърчат пролиферацията и да предотвратят стареенето.Съобщава се, че мутации в 33-37 TERT промотора възникват при 59-90% от пациентите с пролиферативни чернодробни възли и ранен HCC и са свързани с преживяемостта.38
Промените в броя на копията (CNA) са важен подвид на соматичните мутации.Изследванията показват, че широко разпространеното и фокусно бреме на CNA е геномна сигнатура, способна да предскаже туморна имунна инфилтрация и изключване при някои видове рак.39 Сигнализиране на активна инфилтрация, висока цитолитична активност, тежко възпаление и генетични маркери, свързани с представянето на антиген в HCC.Анализът на масива от данни за единични нуклеотидни полиморфизми при 477 субекта разкри ниско натоварване на ЦНС.Обратно, хромозомно нестабилните тумори с високо екстензивно натоварване на CNA показват признаци на имунно отхвърляне и са свързани с пролиферация, възстановяване на ДНК и дисфункция на ТР53.Xu и др.показват, че групата с HCC има по-високи резултати от CNA, отколкото групата с хронично чернодробно заболяване.40 Използвайки секвениране на целия геном на една клетка, беше установено, че CNAs се появяват рано в хепатокарциногенезата и остават относително стабилни по време на прогресията на тумора.41 Chung et al.установяват, че нивата на cfDNA са значително повишени при пациенти с HCC и че CNAs в целия геном в cfDNA са важен независим прогностичен маркер при пациенти с HCC, лекувани със сорафениб.42 Пациентите с по-високо натоварване на CNA са по-склонни да имат прогресия на заболяването и смърт, отколкото тези с по-ниско натоварване на CNA.Ollerich и др.установи, че индексът на нестабилност на броя на копията (CNI) може да се използва за оценка на CNA в cfDNA на пациенти с рак.Те отбелязаха, че пациентите с напреднал рак имат значително по-високи резултати от CNI в сравнение с контролната група, която оценява отговора на пациента към системна химиотерапия и имунотерапия.43 Тези резултати предполагат, че CNA, открити в течни проби от биопсия, могат да служат като прогностични индикатори при пациенти с напреднал рак.HCC на фона на системна терапия.
Понастоящем методите, използвани за откриване на ctDNA, могат да бъдат разделени на целеви и нецелеви методи.Накратко, целеви методи като дигитална полимеразна верижна реакция (dPCR), цифрова PCR BEAMing, рефрактерна на мутация система-PCR, Capp-Seq и Tam-Seq са силно чувствителни към предварително дефинирани гени.Нецелевите методи, като секвениране на целия геном и NGS, предоставят цялостен поглед върху целия геномен пейзаж.44 В сравнение с целевите панели, секвенирането на целия геном може да открие не само точкови мутации и вмъквания, но и пренареждания и вариации на броя на копията.прогноза, а CTC и cfDNA са добри индикатори, които могат да се използват за динамично наблюдение на HCC.45 В допълнение, cfDNA анализът може да бъде по-полезен при откриване на HCC.Ян и др.показват, че cfDNA в плазмата на пациенти с HCC е значително по-висока, отколкото при пациенти с чернодробна фиброза и здрави контроли.В сравнение с AFP, ctDNA се очаква да бъде по-добър маркер за скрининг за ранен HCC.46 В проспективно проучване на 47 течни биопсии, които тестват cfDNA и протеин в популационна популация, те се оказаха ефективни при разграничаване на пациенти с HCC от пациенти без HCC.При проследяване на 331 ултразвукови нормални и AFP-отрицателни пациенти, чувствителността и специфичността на cfDNA за диагностициране на HCC са съответно 100% и 94%, така че cDNA може да открие HCC при асимптоматични HBsAg серопозитивни индивиди.В проучването Yeo48 е открита висока честота (92,5%) на хиперметилиране на промотора RASSF1A при пациенти с HCC.В допълнение, Xu et al.създадоха диагностичен модел за прогнозиране на HCC, използвайки панел от специфични маркери за метилиране със специфичност и чувствителност съответно 90,5% и 83,3%.Панелът позволява пациентите с HCC да бъдат разграничени от пациентите с други чернодробни заболявания, което е по-добро от AFP.Те също така установиха, че нормалните контроли, които са дали положителен тест, може да имат рискови фактори за HCC, като HBV инфекция или история на употреба на алкохол.25 Ние предполагаме, че високорисковите фактори за HCC могат да насърчат хиперметилиране на cfDNA, което след това допринася за прогресията на HCC и по този начин cfDNA може да играе ключова роля в скрининга за високорискови групи.Cai и др.обобщава пълния набор от ctDNA мутации и предлага солидна стратегия за оценка на туморното бреме при пациентите.49 Тази стратегия може да идентифицира туморогенезата средно 4,6 месеца преди промяна на изображението и е показала превъзходна диагностична ефективност в сравнение със серумните биомаркери AFP, AFP-L3 и PIVKA-II.Диагностичната стойност на cDNA теста е демонстрирана, когато оценката на изображението не е налична, така че cDNA тестът е ценен при диагностицирането на ранен HCC във високорискови групи.Наскоро учените използваха технологията NGS, за да анализират индикатори за мултивариантна генетична вариация (включително 5-хидроксиметилцитозин, 5'-мотив, фрагментация, нуклеозомна следа, HIFI) в 3204 клинични проби и cfDNA.50 повторно валидирани HIFI модела с три независими комплекта за обучение, тест и тест показват стабилна и надеждна дискриминация между HCC и не-HCC популации с 95,79% и 95,42% чувствителност съответно в HCC-специфични тестове и тестови набори.Половете са съответно 95,00% и 97,83%.Диагностичната стойност на метода HIFI е по-висока от тази на AFP при разграничаване на HCC от цироза.Освен това ctDNA се използва и при хирургично лечение.Ацуши и др.определят предоперативните серумни нива на ctDNA при пациенти с HCC и установяват, че честотата на рецидивите и честотата на екстрахепаталните метастази в cDNA положителната група са значително по-високи, отколкото в cDNA отрицателната група и нивата на cDNA са значително корелирани.с прогресия на тумора.51 Като силно чувствителен биомаркер, ctDNA може да предвиди способността на HCC да нахлуе в съдовете.Wang и др.извърши секвениране на целия геном на 46 пациенти с HCC и мултивариантният анализ показа, че праговата стойност на алелната честота на cDNA варианта за инвазия в микросъдове е 0,83%, чувствителност 89,7% и специфичност 80,0%.независим рисков фактор за микроваскуларна инвазия при резектабилен HCC, което предполага, че cDNA може да помогне за насочване на оптималното лечение.В заключение, ctDNA е напълно замесена в появата и развитието на HCC и може да се използва за ранен скрининг, хирургична оценка и мониторинг на заболяването.
CTC са злокачествени клетки, получени от първични тумори или метастази, които метастазират в кръвния поток.Туморните клетки секретират матрични металопротеинази (ММР), които разграждат базалната мембрана, позволявайки на туморните клетки да навлязат директно в кръвоносните и лимфните съдове.Повечето CTC обаче се елиминират бързо от аноикис, имунна атака или стрес на срязване.53 Преходът епител-мезенхим (EMT) позволява CTCs да бъдат лесно изолирани от първичната туморна тъкан, да нахлуят в капилярите и да придобият значително подобрена преживяемост, метастази, инвазивност и лекарствена резистентност.Проучванията показват, че има дълбока хетерогенност сред различните туморни клетки в първичните метастатични тумори.По този начин CTC анализът може да доведе до цялостно разбиране на хетерогенността на туморните клетки.54
Специфични маркери за CTCs, свързани с HCC, включват глипикан-3 (GPC3), азиалогликопротеинов рецептор (ASGPR), адхезионна молекула на епителни клетки (EpCAM) и маркери, свързани със стволови клетки, като CD44, CD90, 55 и междуклетъчна адхезионна молекула 1 (ICAM1).) .56 Маркерът GPC3 е закотвен в клетъчната мембрана протеин, който се използва клинично за патологичен анализ и характеризиране на HCC.57 Експресията на GPC3 е по-честа в HCC туморни клетки с междинна и ниска диференциация и насърчава екстрахепаталната миграция;в допълнение, наличието на GPC3+ CTCs показва метастатичен HCC.58 ASGPR е трансмембранен протеин, експресиран само на повърхността на хепатоцитите и е силно експресиран в добре диференциран HCC.EpCAM е един от най-често използваните мембранно-асоциирани протеини за улавяне на CTCs.EpCAM е идентифициран като повърхностен маркер на HCC клетки с характеристики на стволови клетки,59 което корелира с различни клинико-патологични характеристики на HCC, като съдова инвазия, оценени нива на AFP и напреднал стадий на рак на черния дроб в болницата в Барселона (BCLC).Фенотипът 60 CTC EMT е силно метастатичен.54 EMT процеси в CTC насърчават HCC метастази.Експресията на EMT маркери като виментин, усукване, E-box zinc finger binding (ZEB) 1, ZEB2, snail, slug и E-cadherin са изследвани в получени от черния дроб CTCs от пациенти с HCC.58 Системата CanPatrol™, разработена от Cheng [61], класифицира CTCs в три фенотипни подгрупи въз основа на преобладаващо експресирани маркери: епителен фенотип (EpCAM, CK8/18/19), мезенхимален фенотип (виментин, спирала) и смесени фенотипове.При 176 пациенти общият CTC превъзхожда AFP при диференциране на HCC от доброкачествено чернодробно заболяване.Стойностите на AUC за общия CTC, AFP и комбинирания общ CTC и AFP бяха 0,774 (95% CI, 0,704–0,834), 0,669 (95% CI, 0,587–0,750) и 0,821 (95% CI, 0,756–0,886 ).), съответно.CTC класификацията, базирана на EMT, може да предскаже диагнозата HCC, ранен рецидив, метастази и по-кратко общо време.
Понастоящем методите за откриване на CSC включват физически методи и биологични методи.Физическите методи, често наричани обогатяване въз основа на биофизични свойства, зависят главно от физическите свойства на CSC, като размер, плътност, заряд, подвижност и деформируемост.В зависимост от физичните свойства има различни методи като системи, базирани на филтриране, диелектрофореза и др. Последният, известен също като обогатяване, базирано на имуноафинитет, се основава главно на свързване антиген-антитяло, тъй като методът използва антитела срещу специфични за тумора биомаркери като EpCAM, ASGPR, рецептор на човешки епидермален растежен фактор 2 (HER2), простатен специфичен антиген (PSA), човешки панцитокератин (P-CK) и карбамоил фосфат синтаза 1 (CPS1).62 Друг тип, наречен метод без обогатяване, използва поточна цитометрия за разграничаване на CTCs от левкоцити въз основа на по-високо съотношение и размер на ядрото към цитоплазмата.Понастоящем единственият одобрен от FDA тест за откриване на CTCs е системата Cell-Search™, която използва маркера на клетъчната повърхност EpCAM. Въпреки това, комбинираното откриване на CTC, базирано на маркери, може да повиши степента на положителност.54 Смес от антитела срещу ASGPR и CPS1 постигна степен на откриване на CTC от 91% при пациенти с HCC.63 Zhang et al използваха CTC-чип с антитела срещу ASGPR, P -CK и CPS1 и диференцира пациентите с HCC от тези с доброкачествено чернодробно заболяване или не-HCC рак със скорост от 100%.64 Проучване на Wang открива EpCAM+ CTCs при 60% от 42 пациенти с HCC и открива значителни корелации между положителността честота и броя на CTCs с TNM стадий.65 Guo et al установиха, че резултатът от PCR, получен от CTC, е повишен при 125/171 (73%) пациенти, чието ниво на AFP е <20 ng/mL с чувствителност от 72,5% и специфичност от 95,0%, в сравнение с 57,0% и 90,0% за AFP при граница 20 ng/mL.66 Комбинацията от AFP и CTCs може да подобри откриването на HCC.45 Смята се, че CTCs имат предимство пред AFP при ранен скрининг на групи с висок риск за HCC. Въпреки това, комбинираното откриване на CTC, базирано на маркери, може да повиши степента на положителност.54 Смес от антитела срещу ASGPR и CPS1 постигна степен на откриване на CTC от 91% при пациенти с HCC.63 Zhang et al използваха CTC-чип с антитела срещу ASGPR, P -CK и CPS1 и диференцира пациентите с HCC от тези с доброкачествено чернодробно заболяване или не-HCC рак със скорост от 100%.64 Проучване на Wang открива EpCAM+ CTCs при 60% от 42 пациенти с HCC и открива значителни корелации между положителността честота и броя на CTCs с TNM стадий.65 Guo et al установиха, че резултатът от PCR, получен от CTC, е повишен при 125/171 (73%) пациенти, чието ниво на AFP е <20 ng/mL с чувствителност от 72,5% и специфичност от 95,0%, в сравнение с 57,0% и 90,0% за AFP при граница 20 ng/mL.66 Комбинацията от AFP и CTCs може да подобри откриването на HCC.45 Смята се, че CTCs имат предимство пред AFP при ранен скрининг на групи с висок риск от HCC.Обаче базираното на маркер комбинирано откриване на CTCs може да увеличи процента на положителните резултати.54 Смес от анти-ASGPR и CPS1 антитела постига процент на откриване на CTC от 91% при пациенти с HCC.63 Zhang et al.използва CTC-чип с антитела срещу ASGPR, P-CK и CPS1 и също така разграничава пациентите с HCC от тези с доброкачествено чернодробно заболяване или не-HCC при процент от 100%.честотата и количеството ЦОК в съответствие с TNM.65 Guo и съавторите откриха, че показателят на ПЦР, получен от ЦОК, е бил повишен при 125/171 (73%) пациенти, при които ниво на АФП е <20 ng/ml с чувствителност 72,5% и специфичност 95,0% в сравнение с 57,0% и 90,0% за AFP при порогово ниво 20 ng/ml.66 Комбинацията AFP и COK може да подобри откриването на GCK.45 Смята се, че COK имат предимство пред AFP при ранно скрининг груп. честота и брой на CTCs с TNM стадий.65 Guo et al установиха, че PCR, получен от CTCs, е повишен при 125/171 (73%) пациенти, които имат нива на AFP <20 ng/mL с чувствителност от 72,5% и специфичност на 95,0% в сравнение с 57,0% и 90,0% за AFP при гранично ниво от 20 ng/mL.66 Комбинацията от AFP и CTCs може да подобри откриването на HCC.45 Счита се, че CTCs имат предимство пред AFP при ранен скрининг групи.с висок риск от HCC.Въпреки това комбинираното откриване на CTC на базата на маркер може да увеличи процента на положителните резултати.54 Смес от анти-ASGPR и CPS1 антитела постигна 91% степен на откриване на CTC при пациенти с HCC.63 Zhang et al.използва CTC чипове с антитела срещу ASGPR, P-CK и CPS1 и разграничи пациентите с HCC от доброкачествено чернодробно заболяване и не-HCC със 100%.64 Проучването на Wang идентифицира 60% от EpCAM+ CTC при 42 пациенти с HCC и открива значителна корелация между честотата и броя на CTC на етапа на TNM. 65 Guo 等人发现,在AFP 水平<20 ng/mL 的125/171 (73%) 名患者中,CTC 衍生的PCR 评分升高,敏感性为72.5%,特异性为95.0%,而AFP 在截止值为20 ng/mL 时的特异性为57.0% 和90.0%。 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 , , ctc 衍生 pcr 评分 , 敏感性 为 为 72.5%, 为 95.0%, AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 为 为 20ng/ml 时 的 特异性 为 57.0% 和 90.0%。65 Гуо и др.установили, че при 125/171 (73%) пациенти с ниво на АФП <20 ng/ml показателите на ПЦР, получени с помощта на ЦОК, са били повишени с чувствителност 72,5% и специфичност 95,0%, в момента като АФП на ниво отсечки Специфичност съставена 20 нг/мл. установиха, че при 125/171 (73%) пациенти с нива на AFP <20 ng/mL, получените от CTC PCR стойности са повишени с чувствителност от 72,5% и специфичност от 95,0%, докато AFP е на гранична специфичност беше 20 ng/mL.ml е 57,0% и 90,0%.66 Комбинацията от ORP и CTC подобрява откриването на HCC.Смята се, че 45 CTCs са по-добри от AFP при ранен скрининг на високорискови HCC популации.По този начин, за CTC-положителни и високорискови HCC групи, CTC тестването трябва рутинно да се комбинира с ултразвук и откриване на AFP.Въпреки това, CTCs се считат за важни предиктори на туморни метастази и рецидив и откриването на CTCs не се препоръчва самостоятелно като диагностичен инструмент.62 Следователно, CTC може да служи като по-добър прогнозен биомаркер от други използвани в момента маркери. Zhou et al установяват, че пациенти с повишен брой на EpCAM+ CTCs и регулаторни Т клетки показват по-висок риск от развитие на рецидив на HCC, отколкото тези с малък брой CTCs, със съотношение на рецидиви от 66,7% срещу 10,3% (P <0,001).67 Подобно проучване е докладвано от Zhong et al.68 В допълнение, Qi установи, че 101 от 112 пациенти (90,81%) с HCC, включително тези с ранен стадий на заболяването, са положителни за CTCs и че много малки HCC нодули са открити след 3 до 5 месеца проследяване. Zhou et al установяват, че пациентите с повишен брой EpCAM+ CTCs и регулаторни Т клетки показват по-висок риск от развитие на рецидив на HCC, отколкото тези с малък брой CTCs, със съотношение на рецидиви от 66,7% срещу 10,3% (P <0,001).67 A подобно проучване е докладвано от Zhong et al.68 В допълнение, Qi установи, че 101 от 112 пациенти (90,81%) с HCC, включително тези с ранен стадий на заболяването, са положителни за CTCs и че много малки HCC нодули са открити след 3 до 5 месеца проследяване. Чжоу и др.установи, че при пациенти с повишено количество ЦОК EpCAM+ и регулаторни Т-клетки рискът от развитие на рецидиви на ГЦК е по-висок, отколкото при пациенти с ниско количество ЦОК, с коефициент на рецидиви 66,7% срещу 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al установиха, че пациентите с повишени EpCAM+ CTCs и регулаторни Т клетки имат по-висок риск от рецидив на HCC, отколкото тези с ниски CTCs, с честота на рецидив от 66,7% срещу 10,3% (P<0,001)67.Подобно проучване е проведено от Zhong et al.68. В допълнение, Qi установи, че 101 от 112 пациенти (90,81%) с HCC, включително тези с ранно заболяване, са имали CTC и че много малки възли на HCC са открити след 3 до 5 месеца проследяване. Zhou 等 人 发现 , 与 CTC 数量 较 少 的 患者 相比 , , EPCAM+ CTC 和 调节性 T 细胞 数量 升高 的 发生 发生 HCC 复发 的 的 风险 更 高 高 复发率 分别 为 66.7% 和 10.3% (p <0.001) Zhou 等 人 发现 与 与 ctc 数量 少 的 患者 相比 , epcam+ ctc 和 t 细胞 数量 的 患者 发生 hcc 复发 风险 更 , 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0,001)................... Чжоу и др.установи, че пациентите с повишено количество ЦОК EpCAM+ и регулаторните Т-клетки имат по-висок риск от рецидив на ГЦК в сравнение с пациенти с по-малко количество ЦОК, с честота на рецидиви 66,7% и 10,3% съответно (P <0,001). Zhou и др.установиха, че пациенти с повишени EpCAM+ CTCs и регулаторни Т клетки имат по-висок риск от рецидив на HCC в сравнение с пациенти с по-малко CTCs, с честота на рецидиви съответно 66,7% и 10,3% (P <0,001).Подобно проучване е докладвано от Zhong et al.68 Освен това Qi установи, че 101 от 112 пациенти с HCC (90,81%), включително пациенти с ранно заболяване, са имали положителни резултати от CTC и са открили много малки HCC нодули след 3 посещения.Наблюдение до 5 месеца.Те също така откриха CTCs при 12 пациенти с хронична HBV инфекция и откриха малки HCC тумори в рамките на 5 месеца при 2 CTC-положителни пациенти.69 По този начин CTCs могат да се използват за прогнозиране на HCC, 70 но те могат да се използват по-рутинно като предсказващи биомаркери.
Подобно на cfDNA, cfRNA се освобождава в кръвния поток чрез различни системи.Тези молекули в периферната кръв представляват раковата тъкан на произход.В сравнение с маркерите, открити чрез неинвазивни методи, cfRNAs са по-динамично регулирани, тъканно-специфични и изобилни в извънклетъчната среда.Значимостта и диагностичната стойност на 71 miPHKs (miRNAs) в HCC е докладвана в много проучвания.miPHKs са ендогенни некодиращи РНК (ncRNAs), които регулират различни молекулярни биологични дейности чрез инхибиране на транслацията на целеви информационни РНК (mRNAs).miRNAs са разположени в апоптотични тела, капсулирани в екзозоми, но те също могат стабилно да се свързват със серумни протеини и липиди в периферната кръв и могат да се използват за оценка на HCC.микроРНК участват в регенерацията на черния дроб, липидния метаболизъм, апоптозата, възпалението и развитието на HCC.72 Онкогенни miPHK като miR-21, miR-155 и miR-221 са добре известни при HCC.По-специално, miR-21 играе ключова роля в синтеза на колаген в извънклетъчния матрикс и фиброзата и насърчава хепатокарциногенезата чрез активиране на хематопоетичните стволови клетки.72,73 МиРНК на туморни супресори в HCC включват miRNA-122, miRNA-29, семейството Let-7 и семейството miRNA-15.Семейството Let-7 се състои от много miRNAs на туморни супресори, които са насочени към семейството RAS.Семейството miR-15 включва miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 и miR-497, които имат комплементарни последователности за определени иРНК.В допълнение, дългите некодиращи РНК (lncRNAs) и кръговите РНК (cirRNAs) също са важни за ранен скрининг на HCC.lncRNAs представляват най-широкия клас ncRNAs, включително mRNA-подобни ncRNAs, и участват в патогенезата на много човешки заболявания.LncRNA играят регулаторна роля в микросредата на черния дроб и хроничното чернодробно заболяване.74 CircRNAs също са клас ncRNAs с множество функции в регулирането на генната експресия.Напоследък circRNAs се считат за диагностични инструменти за HCC.
Циркулиращата свободна РНК има забележителна стабилност, включително устойчивост на температура, рН и РНКаза, което прави изолирането на fnRNA от периферна кръв по-малко досадно при използване на стандартни методи за пречистване на РНК.Най-често използваните методи включват NGS, микрочипове и RT-qPCR.NGS позволява измерването на микроРНК в целия геном.Този метод обаче е скъп и анализът не е стандартизиран.За разлика от това, RT-qPCR е евтин, бързо усилва нуклеиновите киселини и предлага много предимства като по-висока чувствителност, по-висока точност, по-широк динамичен диапазон и изисква по-малко проби.Микрочипове са друг метод, използван за откриване на miRNA, базиран на чувствителна и специфична хибридизация на целеви miPHK с комплементарни ДНК сонди, 75 но анализът на данни от микрочипове отнема много време.
Съобщава се, че циркулиращите miR-122 и Let-7 са потенциално полезни при диагностициране на HCC в ранен стадий във високорискови групи, маркери при пациенти с HBV-свързани премалигнени възли и HCC в ранен стадий.76 Cai et al.установи, че членовете на семейството Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 и miR-199a/b) са изложени на риск от хронична HCC при пациенти с хепатит.Семейството Let-7 може да служи като ефективен сурогатен биомаркер за прогнозиране на развитието на HCC във високорискови групи, свързани с хроничен хепатит C. 77 miR-122 има висока диагностична точност при откриване на ранен HCC при пациенти с чернодробна цироза.78 Циркулиращият в серума MiR-107 също е оценен в ранните стадии на HCC 79 и е показал добър потенциал при популации с висок риск.Zhou et al съобщават, че панел от miRNAs (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a и miR-801) може да разграничи HCC от хроничен хепатит B (CHB) и цироза чувствителността е 79,1% и 75%, а специфичността съответно 76,4% и 91,1%.80 При свързан с HBV HCC открихме, че нивата на miR150 са значително намалени в сравнение с тези при пациенти с хроничен HBV без HCC (чувствителност 79,1%, специфичност 76,5%).-224 е повишен при HCC в сравнение със здрави контроли, а анализите на подгрупите показват по-високи нива при пациенти с HCC, свързан с HBV.хепатит В-асоциирана цироза и пациенти с HCC идентифицираха siRNA класификатор, съдържащ седем диференциално експресирани siRNAs, които могат да открият HCC в различни контроли;Диапазонът на AUC при ранен скрининг е по-добър, отколкото при AFP доброволци.Те откриха, че четири miRNAs (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p и miR-365a-3p) могат да разграничат пациенти с HCC от пациенти без HCC.Пет свръхекспресиращи miRNAs (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p и miR-148a-3p) се считат за потенциални HBV инфекции при HCC, цироза и биомаркери за CHB, особено miR-34a-5p може да бъде биомаркер за чернодробна цироза85 и може да бъде потенциален биомаркер за ранен скрининг на HCC при популации с висок риск.Най-изследваната lncRNA в HCC е силно активирана при рак на черния дроб (HULC).Други проучвания показват, че HULC, циркулиращ при пациенти с HCC, може да се използва като диагностичен маркер, тъй като тази lncRNA е силно регулирана нагоре при пациенти с HCC в сравнение със здрави индивиди.71,86 Сред другите lnRNA, LINC00152 се счита за най-добрата диагностична lncRNA поради своята висока AUC, чувствителност и специфичност.86 В едно проучване експресията на LINC00152 в периферната кръв постепенно се увеличава от нормални здрави контроли до пациенти с CHB и цироза и накрая е най-висока при HCC.Изследванията на експресията на circSMARCA5 в плазмата на пациенти с HCC показват прогресивно намаляване на експресията при HCC, варираща от хепатит до цироза и предракови лезии.87 Анализът на ROC кривите потвърди потенциала на тези circRNA за разграничаване на пациенти с хепатит или чернодробна цироза от тези с HCC, особено тези с нива на AFP под 200 ng/mL.В допълнение, Zhu анализира 13 617 циклични РНК в плазмени проби от HBV-асоциирани HCC пациенти и потвърди, че 6 циклични РНК се експресират по различен начин при HCC и HBV-асоциирана цироза, което предполага, че cRNA могат да бъдат от полза.маркери за ранен скрининг на високорискови групи като тези, свързани с чернодробно заболяване, пациенти със склероза.88
Екзозомите са мембранни везикули с диаметър 40–160 nm;множество вътреклетъчни везикули се сливат с клетъчната мембрана и се освобождават в извънклетъчния матрикс.Те съдържат много активни компоненти, включително липиди, протеини, РНК и ДНК, и играят ключова роля в комуникацията между клетките, както HCC, така и не-HCC клетки.89,90 Екзозомите регулират прогресията на HCC чрез активиране на хепатоцитни фибробласти и звездовидни клетки, имунни клетки, нормални хепатоцити и HCC клетки.91 В туморната микросреда туморните клетки произвеждат голям брой екзозоми, които се пренасят от раковите клетки към незрелите клетки, които от своя страна участват в онкогенезата, разграждането и клетъчното сигнализиране.92 Проучванията показват, че екзозомите могат да прехвърлят онкогени към нормални клетки по време на патологични процеси, което може да бъде един от механизмите на туморна инвазия и метастази.93 Ролята на екзозомите в прогресията на рака може да бъде динамична и специфична за типа рак, 89 Екзозомите могат да бъдат интернализирани от съседни или отдалечени клетки, за да регулират множество целеви гени в реципиентните клетки, които могат да участват в междуклетъчните комуникационни йони и взаимодействията на клетъчната микросреда, те могат медиират клетъчното сигнализиране и метаболизма.94 Характеристиките и динамичните промени на екзозомните товарни молекули отразяват директно характеристиките и динамичните промени на родителските туморни клетки, 95 което е и основата за използването на екзозоми в диагностиката и прогнозата на рака, както и за прогнозиране на индивидуалния отговор на противоракова терапия ..96
Традиционните лабораторни методи за изолиране и анализиране на екзозоми са сложни, многоетапни и отнемащи време, включително ултрацентрофугиране, филтриране, хроматография с изключване на размера, имуноафинитетно пречистване, Western blotting, ензимно-свързан имуносорбентен анализ (ELISA), PCR и анализ на потока.миниатюризирани системи и платформи за лаборатория върху чип, използващи микро/нанотехнологии, се разработват широко за бързо и удобно изолиране на екзозоми in situ.Анализът за проследяване на наночастици (NTA) е широко използван метод за характеризиране на размера и концентрацията на екзозоми, включително методи като магнитни наночастици и полихидроксиалканоати.Микрофлуидните и електрохимичните методи могат също бързо да открият екзозоми при високи добиви.
Екзозомалните протеини са важни маркери за диагностицирането на HCC.В проучването Arbelaiz, нивото на 98 RasGAP SH3 свързващ протеин (G3BP) и полимерен имуноглобулинов рецептор (PIGR) е значително повишено в екзозомите, получени от HCC, и предполагаемата комбинирана ефикасност на двата протеина е по-добра от тази на AFP.Претоварването с желязо е важен фактор, допринасящ за развитието на HCC.Tseng съобщава, че хепцидинът може да играе ключова роля в резистентността към HCC.99 Екзозоми, получени от серуми на пациенти с HCC, имат значително по-висок брой копия на хепцидинови иРНК варианти, отколкото техните здрави двойници, което предполага, че хепцидин може да бъде нов диагностичен биомаркер за HCC.Протеинът 14-3-3ζ в екзозомите, произведени от 100 HCC, може да намали Т клетъчното активиране, пролиферацията и диференциацията и може да индуцира Т клетъчна трансформация в регулаторни Т клетки, което води до изчерпване на Т клетки.101 Това се подкрепя от няколко проучвания, изследващи укриването на тумора от имунното наблюдение, 102 което може да допринесе за HCC туморогенезата.
В допълнение към наличието на екРНК в плазмата или серума, обогатените с РНК екзозоми могат да се използват за неинвазивно стадиране в реално време при ранен туморен скрининг и за определяне на еволюцията на тумора и отговора на терапията.Нивото на екзозомна miRNA-21 в кръвния серум в групата с HCC е 2,21 пъти по-високо, отколкото в групата с CHB, а в групата с HCC е 5,57 пъти по-високо, отколкото в здравата популация.В проучването на Wang, екзозомите значително повишават HCC в сравнение с пациенти с цироза със стойности на AUC от 0,83 (95% CI 0,74–0,93) и 0,94 (95% CI 0,88–1,00).104 Получените данни изясняват участието на специфични екзозомни товарни молекули в регулирането на онкогенезата и прогресията на HCC.105 Серумната експресия на miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 и miR-26a е последователна.и метастази, а нивата на miR21 са много по-високи при пациенти с HCC, отколкото при здрави контроли, а също и при пациенти с CHB.102 LncRNA има потенциална диагностична стойност при HCC.Проучванията показват, че екзозомите, получени от серуми на пациенти с HCC, имат значително по-високи нива на LINC00161, LINC000635 и lncRNA, активирани от трансформиращ растежен фактор-β, отколкото при пациенти без HCC, и тези lncRNAs са силно свързани с TNM стадия и обема на тумора.110 Conigliaro et al.Установено е, че екзозомите на CD90+ експресират високи нива на lncRNAH19, което значително увеличава освобождаването на васкуларен ендотелен растежен фактор (VEGF) и производството на VEGF-R1 рецептор, като по този начин стимулира ангиогенезата.93 CircRNAs са друг тип екзозомални ncRNAs – експресирани на по-ниски, но стабилни нива при различните видове, circRNAs също показват специфичност за типа клетка, типа тъкан, етапа на развитие и регулаторната активност.111 circRNA са диагностични биомаркери за ранен и минимално инвазивен рак.112 Скорошни клинични проучвания показват, че специфичността на отделните miPHK при прогнозиране на HCC не е идеална.Следователно комплексното откриване с помощта на множество анализи (напр. miR-122 и miR-48a в комбинация с AFP) може да подобри идентифицирането на ранен HCC и разграничаването на HCC от цироза.100
Пациентите с СНВ и чернодробна цироза са най-честата високорискова група за развитие на HCC.За високорисковите групи, след като бъде постигнат устойчив вирусологичен отговор, трябва да се разработи рентабилна стратегия за наблюдение, базирана на риска от HCC, а ранният скрининг е ключът към подобряване на диагностиката и лечението на HCC с висок коефициент на цена-ефективност2 ..Методите за ранен скрининг за рак имат много ограничения: не са разработени ефективни методи за ранен скрининг за повечето видове рак и придържането към тях обикновено е ниско.В сравнение с традиционните методи за ранен скрининг, технологията за течна биопсия има очевидни предимства: лекота на вземане на проби, откриване на панрак, добра възпроизводимост на пробите и ефективен отговор на туморната хетерогенност.Като се има предвид рентабилността на методите, свързани с течна биопсия, тяхното използване при скрининг на HCC не е рутинно тествано.Въпреки напредъка в точното откриване на молекулярно ниво, флуидната биопсия е скъпа за откриване на HCC при целевите пациенти, което ограничава широкото й използване в сравнение със специфични процедури за образна диагностика като ултразвук и ядрено-магнитен резонанс.113,114 Въпреки това, предишно проучване показа, че течната биопсия показва значителна полза по отношение на годините живот, коригирани спрямо качеството (QALYs).115 Ползите от течната биопсия при ранен карцином на стомаха и назофаринкса също са показани.116,117 Настоящото мнение е, че течната биопсия може да допълни серумните биомаркери и радиологичния скрининг при откриването и диагностицирането на тумори.117 118
Според настоящата литература технологията за флуидна биопсия е показала значително по-висока чувствителност и специфичност при ранен скрининг на високорискови групи за рак на черния дроб.Независимо от вида на течната биопсия, тя може да разграничи HCC от високорисковите индивиди без HCC, което предполага значението на ранния скрининг, тъй като разликите между високорисковите и здравите индивиди са очевидни.ctDNA има кратък полуживот и може да се използва за откриване на HCC, така че всякакви промени в получената от тумора cDNA могат да предоставят конкретни доказателства в реално време за туморна прогресия, особено за малки тумори.Високото ниво на ctDNA показва развитието и разпространението на рак и е ранен индикатор за прогресия и рецидив.В допълнение, въз основа на резултатите от ctDNA, пациентите могат да получат индивидуално лечение и проследяване.119 Специфичните места на метилиране могат да бъдат по-добър маркер от AFP за ранно идентифициране на HCC и цирозни възли.При резектабилни случаи на HCC високите нива на cDNA са показателни за микроваскуларна инвазия и следоперативен рецидив и метастази.Промените в броя на копията са свързани с преживяемостта на пациенти с HCC.Може да се предположи, че оценката на cDNA може да бъде включена в цялостното лечение на HCC и cDNA може да служи като ефективен индикатор за терапевтична модулация.Маркери, базирани на специфични генетични мутации в ctDNA, са приети от клиничните насоки за прогнозиране на ефикасността и наблюдение на лекарствената резистентност.ctDNA тестването може да бъде най-полезният инструмент за течна биопсия за ранен скрининг.КТК също играят ключова роля в ранния скрининг на високорискови групи от HCC.Различни маркери на свързаните с HCC CTCs са от особено значение за появата, развитието и рецидивите на HCC.Като мембранни везикули, екзозомите участват в междуклетъчните комуникации, особено в HCC клетките.Циркулиращите микроРНК са стабилни в кръвта и по този начин могат да бъдат по-полезни за ранен скрининг на HCC.Постепенно бяха открити екзозомни протеини и богати на РНК екзозоми и тяхната прогнозна ефикасност за HCC беше потвърдена.Интересното е, че различните етиологии на HCC могат също да бъдат свързани с различни мутации, така че можем да изберем различни биомаркери за ранен скрининг въз основа на различни етиологии на HCC.120
Въпреки това, настоящите техники за флуидна биопсия са съмнителни по отношение на стабилността и не могат самостоятелно да извършат ранен скрининг или мониторинг на HCC, но все пак могат да допълнят индивидуалния скрининг и диагностика.121 Като форма на течна биопсия, откриването и изобразяването на ctDNA, CTC, cfRNA и свързания с екзозома AFP или PIVKA-II има обещаващи приложения в ранната диагностика и прогноза на HCC.Въпреки това, точният механизъм на освобождаване на ctDNA в кръвта остава да бъде изяснен.Разкриването на основните биологични свойства на ctDNA може да улесни използването й като маркер.Малкото количество ctDNA в кръвообращението и строгите изисквания за обработка на пробите са предизвикателства за клиничното прилагане на cDNA откриване при HCC.В допълнение, генетичните мутации нямат специфични характеристики, които позволяват точна идентификация на канцерогените.Тъй като множество генетични и соматични варианти също присъстват в нормалните тъкани, генетичните мутации, идентифицирани чрез течна биопсия, могат да бъдат от ограничена полза при ранен скрининг за HCC.122 Ограниченията на добре дефинирани полезни генни мишени и биомаркери, които помагат да се разграничи кДНК от нетуморна ДНК, са най-важните проблеми при използването на кДНК.липса на полезност на чувствителни и специфични маркери за откриване на CTC.Бяха открити само жизнеспособни клетки с метастатичен потенциал и оптималната комбинация от маркери, обогатени с CSC, беше неясна.Изолирането на CTC за култура и оценката на техните мутационни профили също е предизвикателна задача.Поради проблеми с идентифицирането, изолирането и пречистването на екзозомите, специфичният молекулярен механизъм все още е неясен и предишни изследвания на механизма на екзозомите и HCC не са били задълбочени и начина, по който miRNAs, lncRNAs и протеините се сортират в екзозоми и не е ясно дали поглъщането на екзозома е специфичен тип процес.Използването на екзозоми за диагностика и лечение на HCC е все още на предклиничен етап.Липсата на стандартизация на процедурите за течна биопсия, като вида на епруветките, използвани за събиране на кръв, обема на кръвта, съхранението и откриването на проби, изолирането и обогатяването, може да попречи на използването им в рутинната клинична практика поради различията в практиките в медицинските центрове.Ефикасността на течната биопсия при ранен скрининг, диагностика, оценка на ефикасността и прогнозиране на HCC остава да бъде проучена, особено за високорисковите групи.Технологията за течна биопсия има голям потенциал и се очаква да бъде широко използвана в клиничната практика при рак на черния дроб в близко бъдеще.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Глобална статистика за рака 2020: GLOBOCAN оценява заболеваемостта и смъртността от 36 вида рак в 185 страни.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Седалище на НЗОК.Критерии за диагностика и лечение на първичен рак на черния дроб (издание 2022) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38(2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z и др.Насоки за диагностика и лечение на хепатоцелуларен карцином (издание 2019 г.).Рак на черния дроб.2020; 9 (6): 682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Кокудо Н, Такемура Н, Хасегава К и др.Насоки за клинична практика за хепатоцелуларен карцином: Японско дружество за чернодробни заболявания, 2017 г. (JSH-HCC 4-ти насоки), 2019 г. актуализация.Резервоар за чернодробно заболяване.2019; 49 (10): 1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Течна биопсия при хронично чернодробно заболяване.Ан Хепато.2021;20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Тай ТКЮ., Тан П.Х.Течна биопсия на рак на гърдата: фокусиран преглед.Arch Pathol Lab Med.2021; 145 (6): 678–686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Наблюдение за хепатоцелуларен карцином: настоящи най-добри практики и бъдещи насоки.Гастроентерология.2019; 157 (1): 54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. Европейска изследователска асоциация L, Европейска организация R, C Therapeutics.Клинични насоки EASL-EORTC: лечение на хепатоцелуларен карцином.J Хепарин.2012; 56 (4): 908–943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Комбиниран анализ на AFP и HCCR-1 като полезни серологични маркери при малък хепатоцелуларен карцином: проспективно кохортно проучване.Дис Марк.2012; 32 (4): 265–271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Диференциална експресия на плазмена микроРНК-125b при чернодробно заболяване, свързано с вируса на хепатит В, и диагностичен потенциал на индуциран от вируса на хепатит В хепатоцелуларен карцином.Резервоар за заболяване на черния дроб.2017; 47 (4): 312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Биология и значение на алфа-фетопротеина при хепатоцелуларен карцином.Черен дроб вътр.2019; 39 (12): 2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, et al.Клинични насоки за лечение на хепатоцелуларен карцином в Азиатско-тихоокеанския регион: 2017 актуализация.Международна организация за чернодробни заболявания.2017; 11 (4): 317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei и др.Диагностична стойност на серум PIVKA-II самостоятелно или в комбинация с AFP при китайски пациенти с хепатоцелуларен карцином.Дис Марк.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Недребноклетъчен рак на белия дроб Неплазмена биопсия на хуморална течност: по-близо до тумора!клетка.2020; 9 (11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Течна биопсия: текущо състояние и бъдещи перспективи.Лечение Oncol Res.2017; 40 (7-8): 404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, et al.Ракова биопсия на базата на течност: мултимодален диагностичен инструмент в клиничната онкология.The Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Нуклеинови киселини в човешка плазма.CR Seances Soc Biol Fil.1948; 142 (3-4): 241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, et al.Разширено откриване на циркулираща туморна ДНК чрез анализ на размера на фрагмента.Науката превежда медицината.2018; 10: 466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Дължина на ДНК фрагмент от циркулиращ тумор.PLOS гени.2016;12(7):e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. Циркулираща туморна ДНК: обещаващ биомаркер при биопсия на рак на течна основа.целеви тумор.2016; 7 (30): 48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Откриване на циркулираща туморна ДНК в ранни и късни стадии на човешки злокачествени заболявания.Науката превежда медицината.2014;6(224):224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Течна биопсия за мутационен прогнозен анализ на солиден рак: гледна точка на патолога.J Биотехнология.2019; 297: 66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Ранно откриване на тумор чрез скрининг на ДНК в циркулираща плазма: реклама или надежда?Белгийско клинично право.2020 г.;75(1):9-1 doi:10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Ефект на вируса на хепатита и стареенето върху метилирането на ДНК в човешката хепатокарциногенеза.Хистопатология.2010; 25 (5): 647–654.doi: 10.14670/HH-25.647


Време на публикуване: 23 септември 2022 г